期刊简介
本刊由著名泌尿外科专家吴阶平、郭应禄院士任名誉主编，聘请国内泌尿界知名专家、教授担任顾问及编辑委员会委员。该杂志为泌尿外科专业学术期刊，刊登国内外最新的泌尿外科疾病的诊断及最先进的治疗方法等。
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首页>现代泌尿外科杂志
- 杂志名称：现代泌尿外科杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：西安交通大学
- 国际刊号：1009-8291
- 国内刊号：61-1374/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：西安交通大学期刊中心评为优秀进步奖（02）期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 维普收录(中)
PA K1基因3′-U TR区荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定
刘伟；寇博；贺大林；郭鹏
关键词：p21小GTP酶活化激酶1, 3′端非翻译区, 荧光素酶报告基因, microRNA-145, 膀胱癌
摘要：目的：针对人p21小GTP酶活化激酶1（p21‐activated kinase‐1，PAK1）基因的3′端非翻译区（3′‐untranslated region ，3′‐UTR）构建PAK1的荧光素酶报告基因载体，并对其进行鉴定和筛选，为后续 PAK1与microRNA‐145（miR‐145）的功能和机制研究提供实验基础。方法用PCR法扩增出 PAK1基因3′‐U T R片段，经连接、酶切插入到pGL3载体上，构建了 PAK13′‐UTR荧光素酶报告基因载体。通过生物信息学方法预测miR‐145可能靶向作用于PAK1基因的3′‐UTR ，后将上述重组质粒以及miRNA mimics（miRNA模拟物）、miRNA‐Con（miRNA control ，miRNA 阴性对照）瞬转到膀胱癌 T24和J82细胞系中，并检测其相对荧光素酶活性。另外，利用实时定量 PCR法检测不同实验组中 PAK1的表达情况。结果成功构建了重组pGL3‐PAK13′‐UTR WT质粒，并通过双酶切以及测序的方法验证所得结果的正确性。且转染 pGL3‐PAK13′‐UTR WT 质粒后， T24／miR‐145组和J82／miR‐145的相对荧光素酶活性显著低于T24／miR‐con和J82／miR‐con组，差异有统计学意义（P＜0．05）。另外，通过实时定量PCR法发现，miR‐145 mimics组的PAK1表达水平显著低于miR‐145 con组。结论成功构建了PAK1基因3'‐UTR区荧光素酶报告载体，且miR‐145能够显著降低其荧光素酶活性，提示miR‐145能靶向负调控 PAK1的表达。
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